PCR儀根據(jù)DNA擴增的目的和檢測的標準可以分普通PCR儀、梯度PCR儀、原位PCR以及實時熒光定量PCR儀等幾類。
一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,稱之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。主要是用作簡單的,對目的基因退火溫度的擴增。主要應(yīng)用于科研、教學、臨床醫(yī)學、檢驗、檢疫等。
PCR儀的PCR反應(yīng)過程與細胞內(nèi)的DNA復(fù)制相似,但PCR的反應(yīng)體系要簡單的多,主要包括DNA靶序列、引物、4種單核苷酸dNTP、耐熱DNA聚合酶以及合適的緩沖液體系。
PCR反應(yīng)過程有以下3個步驟:
1.變性
將反應(yīng)體系混合物加熱到94℃,維持較短時間(大約15-30 s),使目標DNA雙螺旋的氫鍵斷裂,形成單鏈DNA作為反應(yīng)模板。
2.退火
將反應(yīng)體系冷卻至特定的溫度(引物的TM值左右或以下),引物與DNA模板的互補區(qū)結(jié)合,形成模板引物復(fù)合物。
3.延伸
將反應(yīng)體系的溫度提高到72℃并維持一段時間,引物在耐熱聚合酶的作用下,以引物為固定起點,以4種單核苷酸(dNTP)作為底物合成新的DNA鏈。
以上三步驟作為一個循環(huán)重復(fù)的進行,每一循環(huán)的產(chǎn)物作為下一循環(huán)的模板。如此循環(huán)數(shù)十次,從而使目的基因得到指數(shù)級擴增,達到檢測或獲取基因的目的。