簡單的說,
PCR儀的PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內(nèi)大量合成?;旧纤抢肈NA聚合酶進(jìn)行專一性的連鎖復(fù)制.目前常用的技術(shù),可以將一段基因復(fù)制為原來的一百億至一千億倍。
PCR的要素即基本的PCR須具備:
1.要被復(fù)制的DNA模板(Template);
2.界定復(fù)制范圍兩端的引物(Primers);
3.DNA聚合酶Taq(Polymearse);
4.合成的原料(四種脫氧核苷酸)及水。
熒光定量PCR技術(shù)檢測準(zhǔn)確、快速、重復(fù)性高,在食品安全領(lǐng)域發(fā)揮重要作用,目前已經(jīng)應(yīng)用于食源性致病病毒,食品過敏源,轉(zhuǎn)基因食品,乳品等檢測,那具體是怎么樣實施的呢?
在食源性致病病毒檢測中,長期以來采用細(xì)菌培養(yǎng)法。但是這種方法檢測周期長,靈敏度低,操作復(fù)雜,熒光定量PCR技術(shù)動態(tài)范圍寬,靈敏度高,檢測速度快(40-60 min),已在副溶血性弧菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和和阪崎腸桿菌等食源性細(xì)菌檢測中越來越重要。熒光PCR儀對2084個感染性腹瀉標(biāo)本的檢測,其中培養(yǎng)法陽性檢出率為45.2%而熒光PCR為90.1%。再如出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SNT中規(guī)定對食品中致病菌檢測方法使用熒光PCR方法,SN/T中要求使用熒光PCR儀方法檢測奶粉中阪崎腸桿菌檢驗方法。