透析只需要使用專用的半透膜即可完成,通常是將半透膜制成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入
透析袋內(nèi),將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內(nèi),而鹽和小分子物質(zhì)不斷擴散透析到袋外,直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達到平衡為止。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為“保留液”,袋(膜)外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。
透析的動力是擴散壓,擴散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度,還正比于膜的面積和溫度,通常是4℃透析,升高溫度可加快透析速度。
透析袋可用動物膜和玻璃紙等,但用多的還是用纖維素(再生纖維素RC、纖維素酯CE、PVDF等)制成的透析袋,目前常用的各種尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋內(nèi)的生物大分子的最小分子量,縮寫為MwCO)大概有100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等種類,單位為道爾頓(D)。
透析袋制成管狀,其扁平寬度為8-77mm不等。為防止干裂,出廠時都用10%的甘油處理過,并含有極微量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì),它們對蛋白質(zhì)和其它生物活性物質(zhì)有害,用前必須除去。
透析袋的儲存條件:
未處理前的透析袋可存放于0-43℃環(huán)境下,密封包裝好以防干裂;處理好暫時不用的透析袋需要放置到透析袋儲存液中,并放于4-37℃。
相關(guān)儲存要點須知:
1.在適當(dāng)?shù)膬Υ鏃l件下,保質(zhì)期一般超過兩年。干透析袋應(yīng)儲存在室溫或4℃的聚乙烯袋中。未開封的透析袋儲存在4℃的環(huán)境中。
2.一旦透析袋變濕,應(yīng)將其浸泡在溶液中,不允許干燥。持續(xù)干燥會導(dǎo)致孔隙結(jié)構(gòu)不可逆的損壞。
3.清洗后,用過的透析袋可儲存在4℃或30%乙醇的蒸餾水中,以確保透析袋始終浸沒在溶液中。如果長時間不使用,可以加入少量的二氧化氮來防止細菌生長。從現(xiàn)在開始使用透析袋時必須戴手套。